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技術(shù)文章 / article
貼壁細胞總有部分圓形或者漂浮的是正常情況嗎？
2022-06-16 瀏覽次數(shù)：6016
大部分貼壁細胞培養(yǎng)時都會有一些圓形透亮的細胞存在，也會有一些圓形細胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細胞或由于局部空間不足被擠出的細胞，只要細胞持續(xù)增殖，都會有一些圓形細胞或脫落漂浮細胞，不影響細胞整體增殖和實驗，保持正常換液、傳代周期即可。細胞具體情況也可以參考細胞庫不同細胞照片比對，大部分貼壁細胞都會有圓形細胞、脫落細胞、細胞內(nèi)顆粒等情況。
如何消除組織培養(yǎng)的污染？
當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查 HEPA 過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素 B 和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。
1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。
2)分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性霉素 B 推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
3)每天觀測細胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。
4)確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度 2-3 倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞 2-3 代。
5)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。
6)重復(fù)步驟 4。
7)在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 4-6 代，確定污染是否以已被消除。
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