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技術文章 / article
細胞復蘇的小技巧
2022-08-09 瀏覽次數(shù)：1061
細胞培養(yǎng)是指細胞在體外的培養(yǎng)技術，即在無菌條件下，從機體中取出組織或細胞，模擬機體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長和繁殖的方法。通過細胞培養(yǎng)我們可以獲得大量的、性狀相同的細胞，以便于研究細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學組成及功能和機制。
細胞復蘇流程：
1、將凍存的細胞從液氮罐中取出，立即放入37°C的水浴中進行融化，輕柔晃動，加速融化，直到小瓶中只剩下一小塊冰，時長應控制在1min中；
2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉(zhuǎn)移無菌操作臺中，打開瓶蓋前，用酒精燈火焰對瓶口進行消毒；
3、將預加熱的新鮮*培養(yǎng)基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中，加入適量濃度和體積的*培養(yǎng)基，輕柔混合均勻；
4、200 × g左右細胞懸浮液離心5-10分鐘。實際的離心速度和持續(xù)時間因細胞類型而異。棄掉上清，加入新鮮*培養(yǎng)基重懸細胞，并將其轉(zhuǎn)移到適當?shù)呐囵B(yǎng)容器和推薦的培養(yǎng)環(huán)境中。
注意事項：
1、液氮溫度低，小心低溫對人造成的傷害，在液相中儲存的冷凍瓶在解凍時存在爆炸的風險，因此，取出凍存管的時候，要做好個人防護。
2、通常細胞集中儲藏在液氮中，取出時應迅速，避免溫差對其他凍存細胞造成影響。
3、復蘇細胞的核心技術，簡而言之就是快融，將在37°C水浴中快速解凍冷凍細胞(< 1分鐘。
4、解凍時，凍存管先放入無菌一次性PE手套中，再放入水中融化，避免污染也方便操作。
5、用預熱過的培養(yǎng)基慢慢稀釋解凍的細胞。
6、解凍細胞后，在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)時，應盡量維持高密度，以提高細胞存活率。
7、注意無菌操作，避免細胞發(fā)生污染。
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