胰酶的使用注意事項(xiàng)及配制方法

胰酶使用注意：

1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。

2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。

胰酶配制方法：

1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對(duì)細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解

2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250） 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力攪拌2-3小時(shí)，調(diào)pH 7.8-8.0，過(guò)濾除菌。）

3、pbs（0.1%胰酶溶液的配制：稱(chēng)取胰酶粉末0.1g，先用少許滅菌過(guò)的PBS調(diào)成糊狀，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜，過(guò)濾滅菌，分裝，4℃保存?zhèn)溆?。? 或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱(chēng)取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許D-Hanks 平衡鹽溶液（pH7.2 左右）調(diào)成糊狀，然后再補(bǔ)足D-Hanks 平衡鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4 小時(shí)或冰箱過(guò)夜，并不斷攪拌振蕩；2.次日，先用濾紙粗濾，再進(jìn)行過(guò)濾除菌，分裝入瓶中，低溫冰箱保存?zhèn)溆?，常用濃度?.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH 至7.2 左右。）

一般0.45微米的一次性濾器過(guò)濾除菌，至于作用效果，需要消化一次細(xì)胞感覺(jué)一下，因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣，有的作用溫和，有的作用劇烈。

4、是否需要四度放置過(guò)夜，取決于你的胰酶的純度。過(guò)去的胰酶純度不高，所以難以溶解，需要四度過(guò)夜. 而現(xiàn)在的胰酶純度都很高，就沒(méi)有必要四度過(guò)夜。從理論上來(lái)說(shuō)，四度放置過(guò)夜，給細(xì)菌生長(zhǎng)的機(jī)會(huì)，盡管過(guò)濾可以出去細(xì)菌，可是出不掉其代謝產(chǎn)物。

胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因，考慮有：

1、過(guò)期或是酶已經(jīng)部分變性

2、溶液ph值不對(duì)

3、在沒(méi)過(guò)濾之前的絮狀沉淀是正?，F(xiàn)象，因胰酶多取自動(dòng)物胰腺，沉淀為組織塊，過(guò)濾后即可。