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        細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)基的作用

        2022-01-13 瀏覽次數(shù):1767

        1.液體培養(yǎng)基貯存于4℃ 冰箱,避免光照,實驗進行前放在37℃ 水槽中溫?zé)帷?S'、


        2.液體培養(yǎng)基(加血清)存放期為六個月,期間glutamine可能會分解,若細(xì)胞生長不佳
        可以再添加適量glutamine。
        3.粉末培養(yǎng)基配制(以1升為例):
        3.1.細(xì)胞培養(yǎng)基通常須添加10%血清,因此粉末培養(yǎng)基之配制體積為900ml,pH為7.2-7.4。NaHCO3為另外添加,若將NaHCO3粉末直接加入液體培養(yǎng)基中會造成pH之誤差,或局部過堿。因此粉末培養(yǎng)基及NaHCO3粉末應(yīng)分別溶解后才混合,然后用CO2氣體調(diào)整pH,而非用強酸(HCl)或強堿(NaOH),因為氯離子對細(xì)胞生長可能有影響,且貯存時培養(yǎng)基的pH易發(fā)生改變。生物3.2.材料:純水(milli-Q水或二次至三次蒸餾水,水品質(zhì)非常重要),粉末培養(yǎng)基,NaHCO3
        電磁攪拌器,無菌血清瓶,0.1或0.2mm無菌過濾膜,pH計,真空泵,CO2氣體。
        3.3.步驟:
        3.3.1.取粉末培養(yǎng)基溶于700mlmilli-Q水中,攪拌使其溶解。
        3.3.2.稱取適量之NaHCO3粉末溶于200mlmilli-Q水中,攪拌使其溶解,然后通入CO2氣體至飽和,約3-5分鐘。
        3.3.3.將溶解且含飽和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液體培養(yǎng)基中混合。混后溶液之pH應(yīng)為7.2-7.4,除非pH值偏差太大,否則不需用酸堿再調(diào)整之。若為太堿,可再通入CO2氣體調(diào)整pH。培養(yǎng)基以真空幫浦通過過濾膜時,pH會升高0.1-0.2。
        3.3.4.以0.1或0.2mm無菌過濾膜過濾滅菌,同時分裝至無菌容器中,標(biāo)示培養(yǎng)基種類、日期、瓶號等,貯存于4℃。(血清亦可加入培養(yǎng)基中一起過濾)
        3.3.5.配制之培養(yǎng)基配制須作生長試驗與污染測試。



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