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技術(shù)文章 / article
細胞培養(yǎng)過程中添加劑起什么作用？
2021-12-31 瀏覽次數(shù)：1583
能量來源：谷氨酰胺
L－谷氨酰胺是一種氨基酸，細胞的重要能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。同時L-谷氨酰胺不穩(wěn)定，在中性的水溶液中會自發(fā)降解； 降解產(chǎn)物對細胞有毒性 （對干細胞，原代細胞影響尤其大）。能影響細胞活性、蛋白表達水平及糖基化模式等。那如何解決呢？
方案有二：
選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基，自己添加
選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物
經(jīng)過科學(xué)家不斷努力，終于找到了穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物： glutaGRO。它有何方功能呢？原來，它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺縮合形成的二肽，穩(wěn)定性高，可在室溫下保存，2年穩(wěn)定 （谷氨酰胺需冷凍保存），使用更方便。同時不易降解，不產(chǎn)生有毒性氨，更利于細胞生長。但仍需注意：該替代物適于哺乳動物細胞培養(yǎng)，但不適合昆蟲細胞培養(yǎng)體系！！！
能量來源 : 丙酮酸 (Sodium Pyruvate)
丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源。當葡萄糖不足的時候，細胞可以代謝丙酮酸鈉，保證細胞更好地生長。同時某些對葡萄糖利用存在問題的細胞必需添加哦。
平衡鹽溶液
平衡鹽溶液主要是由無機鹽、葡萄糖組成；它的作用是維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)；同時用于取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配制其他試劑等。
它由這些小伙伴組成：PBS 磷酸鹽緩沖液，DPBS（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Salines）， Earle’s 平衡鹽， Hank’s 平衡鹽。
培養(yǎng)基中的pH緩沖劑
絕大多數(shù)細胞的最佳生長條件是pH 6.8-7.8。
多數(shù)培養(yǎng)基利用碳酸氫鈉進行緩沖，碳酸氫鈉的緩沖需要二氧化碳。其中高碳酸氫鈉 (1.5 – 3.7g/L) 需要 5 – 10% CO2，低碳酸氫鈉(0.35g/L) 不需要二氧化碳孵箱。當然，也有不依賴于二氧化碳的氫離子緩沖劑如：HEPES，在一定范圍內(nèi)對細胞無毒性作用。能較長時間控制恒定的pH范圍，保證細胞的良好生長。大家可以根據(jù)細胞和實驗要求具體選擇。
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