雙抗和胰酶的使用方法

雙抗

一、什么是雙抗？

青霉素加上鏈霉素，俗稱“雙抗"。

二、培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎？

加不加雙抗不是絕對的，視實際情況而定。

如果你實驗室條件足夠好，如果你操作足夠規(guī)范，就盡量不要加雙抗了。

相反，如果你實驗條件不夠，操作也沒有絕對把握，還是加的好。

好的方法是做個實驗對照，看有沒有必要加雙抗。

三、如何加雙抗？

加在DMEM里，因為如果是直接在換液傳代滴加的話，那個雙抗的濃度實在不好控制，如果加多了話對細胞毒性太大，如果擔(dān)心時效，可以Z在培養(yǎng)液配好后分裝于100ml的小玻璃瓶中，在每啟用一瓶之前加，加了之后應(yīng)盡快用完。

胰酶

一、胰酶使用的時候要注意什么？

1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。

2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。

二、以貼壁細胞的消化為例：

1、吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清；

2、加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過細胞即可，根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘（不同的細胞消化時間有所不同）

3、顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來。

4、此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的*細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。

如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。

常用的細胞消化液為胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使細胞間的蛋白質(zhì)（如細胞外基質(zhì)）水解，改變細胞間的連接，使組織或細胞片分散成單個細胞，制成細胞懸液用于進一步的實驗。

影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時間及溫度等）、消化時的溫度（氣溫、細胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等 。

加入胰蛋白酶-EDTA溶液，視細胞瓶的大小加入體積為2ml或更多（依培養(yǎng)器皿的大小而定），以使充分浸潤；

一般消化時間約為1至3分鐘，肉眼觀察瓶底由半透明（細胞單層連接成片）轉(zhuǎn)為透明、點狀（出現(xiàn)細小空隙）時，棄去細胞消化液，或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化，吹打分散；如見大量細胞片狀脫落，已消化過頭，則不能頃倒消化液而直接進行下一步操作。（消化過頭，可造成大量細胞從瓶壁上脫下，甚至造成細胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑，所以加入*培養(yǎng)基可以終止反應(yīng)。