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        ELISA的原理及基本類型

        2021-10-27 瀏覽次數(shù):2276

        Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。
        本文將通過一下幾點(diǎn)詳細(xì)的闡述Elisa試劑盒:
        1.Elisa的原理
        2.Elisa的類型


        Elisa的原理:
        ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
        進(jìn)行檢測(cè)時(shí),樣品中的受檢物質(zhì)(抗原或抗體)與固定的抗體或抗原結(jié)合。通過洗板除去非結(jié)合物,再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,此時(shí),能固定下來的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過加入與酶反應(yīng)的底物后顯色,根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量,進(jìn)行定性或定量的分析。
        由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的靈敏度。

        Elisa的類型:
        ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:

        1. 固相的抗原或抗體;

        2. 酶標(biāo)記的抗原或抗體;

        3. 酶作用的底物。

        根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具備條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。

        1. 雙抗體夾心法測(cè)抗原



        針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原,不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原,因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。

        2. 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原

        首先將特異性抗體包被于固相載體表面,經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液,另一組只加酶標(biāo)記抗原,經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測(cè)定的未知抗原的量。此方法測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可,對(duì)小分子抗原如激素和藥物類的測(cè)定常用此法。優(yōu)點(diǎn)是快,缺點(diǎn)是需要較多量的酶標(biāo)記抗原。

        3. 免疫抑制法測(cè)抗原

        被檢標(biāo)本對(duì)底物顯色的抑制程度與標(biāo)本中所含抗原的量成正比,二者之差即為預(yù)測(cè)抗原的量。

        4. 間接法測(cè)抗體


        是檢測(cè)抗體常用的方法,原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體。

        本法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標(biāo)抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。主要用于對(duì)病原體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。


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