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技術文章 / article
QBC939細胞培養
2017-01-12 瀏覽次數：2277
1、實驗進行前，無菌室及無菌操作臺（laminarflow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉10分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養基相同亦不共享培養基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應讓無菌操作臺運轉10分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。
2、無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應移出，以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在抬面之中央無菌區域，勿在邊緣之非無菌區域操作。
3、小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
4、工作人員應注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作，并選擇適當等級之無菌操作臺（至少ClassⅡ）。操作過程中，應避免引起aerosol之產生，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等，并避免尖銳針頭之傷害等。
5、定期檢測下列項目：5.1CO2鋼瓶之CO2壓力5.2CO2培養箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染（水盤的水用無菌水，每周更換）。5.3.無菌操作臺內之airflow壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA過濾膜，預濾網（300小時/預濾網，3000小時/HEPA）。6.水槽可添加消毒劑（Zephrin1:750），定期更換水槽的水
6、粉末培養基配制好后（加了血清），一般在4度盡量不要超過1個月，如在-20度存放時間可長一些，但也不要超過3-4個月，可能對于永生化細胞株來說要求不是太高，細胞嬌弱，放置時間不宜過長。
7、開紫外線照射臺的時候，就將培養基、酶、DHANKS液那到室外讓它自然升溫。這樣40分鐘后，溫度也升上來了。有很多人將他放到37度水浴鍋里加熱。一定要注意水浴鍋的衛生，有的常年不清洗，里面很臟，容易在外面瓶身上吸附大量細菌。因此用它的也一定要勤換水。從水浴鍋拿出后，找個毛巾擦干上面的水。
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